實時熒光定量PCR儀的光學系統(tǒng)是其實現(xiàn)精準核酸定量的核心模塊,由光源、濾光片與檢測器三大核心組件構成,通過協(xié)同工作實現(xiàn)熒光信號的精準采集與分析。
光源是光學系統(tǒng)的能量基礎,現(xiàn)代儀器普遍采用高亮度、長壽命的LED或白光半導體光源。LED光源具備單色性好、能耗低、壽命長的優(yōu)勢,無需頻繁更換,且通過多色LED陣列可實現(xiàn)多通道同時檢測,滿足復雜實驗需求;白光半導體光源則通過等距光纖傳輸光線,確保不同孔位光照均勻性,消除邊緣效應,提升檢測一致性。
濾光片組是光學系統(tǒng)的“光譜閘門”,由激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片組成。激發(fā)濾光片僅允許特定波長(如494nm)的光通過,激活熒光基團;發(fā)射濾光片則過濾雜散光,僅捕獲目標波長(如522nm)的熒光信號。現(xiàn)代濾光片采用窄帶設計,帶寬可窄至0.4nm,矩形度(通帶與阻帶過渡區(qū)陡峭度)達0.8以上,有效抑制相鄰通道信號串擾,確保多通道檢測的準確性。
檢測器是光學系統(tǒng)的信號轉換核心,主流技術包括光電倍增管(PMT)和CMOS傳感器。PMT具有單光子級靈敏度,適合低拷貝數(shù)樣本檢測,但動態(tài)范圍較窄;CMOS傳感器則兼顧高靈敏度與寬動態(tài)范圍(如16-bit量化),可同時檢測強弱信號,且支持全孔位并行檢測,大幅提升通量。部分儀器采用PMT掃描機制,通過機械轉動逐孔檢測,雖速度較慢但信噪比優(yōu)異;全孔位并行檢測的CMOS陣列則顯著縮短實驗時間,提升效率。